黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2 的原核表达载体
的构建及表达分析
陈 巧 陈书霞* 王聪颖 郝丽宁 万旭花 申晓青 程智慧
西北农林科技大学园艺学院，农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，陕西杨
Construction and Expression of a Cucumber Lipoxygenase Gene CsLOX2 in
Prokaryotic Cells
CHEN Qiao，CHEN Shu-xia*，WANG Cong-ying，HAO Li-ning，WAN Xu-hua，SHEN Xiaoqing，
CHENG Zhi-hui
College of Horticulture， Northwest A&F University， Key Laboratory of Horticultural Plant Germplasm Resources
摘要 以先前克隆到的黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2 全长的cDNA 为模板，用含有特异性酶切位点
的Yh1、Yh2 为引物，通过PCR 方法将黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2 的ORF 区构建到大肠杆菌表达载体
pGEX-4T-1 上获得原核表达载体p4t-LOX2，将该表达载体p4t-LOX2 转化到大肠杆菌菌株BL21（DE3）
中，获得相应的重组工程菌。在IPTG 诱导下，通过SDS-PAGE 电泳，得到一条约115 kD 的融合蛋白条带，
除去pGEX-4T-1 自身诱导的约26 kD 大小的GST 标签蛋白后，CsLOX2 编码一个约89 kD 的蛋白。 经过
融合蛋白表达体系的优化分析，表明该融合蛋白在 37℃，0.80 mmol·L-1 IPTG 诱导表达 10.5 h，可获得
融合蛋白的最大表达量。
关键词 ：
黄瓜 ,
脂氧合酶 ,
原核表达
Abstract ：The ORF of cucumber（Cucumis sativus L.）CsLOX2 gene was inserted into an
expression vector pGEX-4T-1 through PCR method using specific primers Yh1 and Yh2，and the
recombined expression vector p4t-LOX2 was constructed. The expression amount of fusion protein
was detected under different expressive conditions，such as different time，different temperature and
different concentration of IPTG. The 115 kD fusion protein was obtained and induced by IPTG and it
showed that CsLOX2 gene encoded a 89 kD protein after the 26 kD GST protein tag was removed．The
proper induction condition was 37 ℃ temperature，0.80 mmol·L-1 IPTG concentration and 10.5 h
inducing time.
Key words ：
Cucumber
Lipoxygenase
Prokaryotic expression
收稿日期: 2013-01-09
出版日期: 2013-03-26
基金资助: 国家自然科学基金项目（31071813），陕西省留学人员优先资助项目（A289021202），高校基本科研业务费项目
通讯作者:
陈书霞，女，副教授，博士生导师，专业方向：蔬菜生理与生物技术，E-mail：
shuxiachen@nwsuaf.edu.cn
作者简介 : 陈巧，女，硕士研究生，专业方向：蔬菜生理与生物技术，E-mail：chenqiaozhen510@163.com
引用本文:
陈巧, 陈书霞, 王聪颖, 郝丽宁, 万旭花, 申晓青, 程智慧. 黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2 的原核表达载体
的构建及表达分析[J]. 中国蔬菜, 2013, 1(10): 29-35.
CHEN Qiao, CHEN Shu-Xia, WANG Cong-Ying, HAO Li-Ning, WAN Xu-Hua, SHEN Xiao-Qing, CHENG Zhi-Hui. Construction and Expression of a Cucumber Lipoxygenase Gene CsLOX2 in
Prokaryotic Cells. , 2013, 1(10): 29-35.
链接本文:
https://www.cnveg.org/CN/ 或 https://www.cnveg.org/CN/Y2013/V1/I10/29
[1]
刘立功1，刘士莉2，曾 黎3，王 晶4，郭乃笑1，张 峰1*. 水果黄瓜新品种绿精灵2号的选育
[2]
刘宏运，林威柱，王健，孙锦，束胜，郭世荣，王玉*. 叶面喷施不同浓度腐胺复配剂对黄瓜幼苗高温抗性的影响
[3]
朱广雪1，2☆，阎昱韬2☆，孙炳学2，周荣佳2，岳圆圆2，谢学文2，柴阿丽2，李磊2，李宝聚2*，石延霞2*. 多主棒孢SdhB-H278Y突变位点real-timePCR检测体系的建立与应用
[4]
董航，吴金宝，秦开，姜振，付连双，吕爽，刘守伟，吴凤芝. 不同品种小麦根系分泌物对黄瓜生长、枯萎病发生及病原菌的影响
[5]
付丽军，李聪晓，高峰. 华南型黄瓜新品种唐春301的选育
[6]
马飞，王菁，王君正，胡晓辉. 甲基营养型芽孢杆菌对黄瓜穴盘育苗效果的影响
[7]
肖雪梅，马宁，李菊，王瑞，胡琳莉，武玥，郁继华. 自毒胁迫对黄瓜砧穗种子萌发和抗氧化特性的影响
[8]
张泽钦，周朝阳，张小兰. 外施蔗糖促进黄瓜侧枝伸长
[9]
李欣，张旭，剌世凯，谢鹰飞，陈世君，高丽红，田永强. 黄瓜秸秆协同降解菌群的筛选及其促生效果探究
[10]
杨和连，张煜广，郭卫丽，陈碧华，李新峥，周俊国. 南瓜砧木嫁接对黄瓜幼苗生长及镉积累特性的影响
[11]
武隆楷，姜玥珊， 冯倩，孙敏涛，闫妍，李衍素，贺超兴，于贤昌，王君. 根施甘氨酸对日光温室秋冬茬黄瓜生长、产量及品质的影响
[12]
康忱，赵雪芳，王鹏，李亚栋，田哲娟，吴志明. 黄瓜纤维素合成酶CESA 家族基因鉴定及非生物胁迫响应分析
[13]
扈进冬，魏艳丽，王贻莲，刘宝军，李纪顺. 越南伯克霍尔德氏菌B418 配合噻唑膦提高对黄瓜根结线虫的防控效果
[14]
王航，温常龙，毛爱军. 水果黄瓜新品种京研迷你8号的选育
[15]
赵福顺 1，谭克 2，姜奇峰 2，金玉忠 2，马艺荞 2，王宇微 2，蔺骁萱 2，于翠香 1，张海燕 1. 华南型黄瓜新品种吉杂 19 的选育
