黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2 的原核表达载体
的构建及表达分析

陈巧; 陈书霞; 王聪颖; 郝丽宁; 万旭花; 申晓青; 程智慧

中国蔬菜 ›› 2013, Vol. 1 ›› Issue (10): 29-35.

黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2 的原核表达载体
的构建及表达分析

陈　巧　陈书霞*　王聪颖　郝丽宁　万旭花　申晓青　程智慧

西北农林科技大学园艺学院，农业部西北地区园艺作物生物学与种质创制重点实验室，陕西杨
凌 712100

收稿日期:2013-01-09 出版日期:2013-05-03 发布日期:2013-03-26
通讯作者: 陈书霞，女，副教授，博士生导师，专业方向：蔬菜生理与生物技术，E-mail： shuxiachen@nwsuaf.edu.cn
作者简介:陈巧，女，硕士研究生，专业方向：蔬菜生理与生物技术，E-mail：chenqiaozhen510@163.com
基金资助:
国家自然科学基金项目（31071813），陕西省留学人员优先资助项目（A289021202），高校基本科研业务费项目
（QN2011088），西北农林科技大学国际合作基金项目（A213021102）

Construction and Expression of a Cucumber Lipoxygenase Gene CsLOX2 in
Prokaryotic Cells

CHEN Qiao，CHEN Shu-xia*，WANG Cong-ying，HAO Li-ning，WAN Xu-hua，SHEN Xiaoqing，
CHENG Zhi-hui

College of Horticulture， Northwest A&F University， Key Laboratory of Horticultural Plant Germplasm Resources
Utilization in Northwest China， Yangling 712100， Shaanxi， China

Received:2013-01-09 Online:2013-05-03 Published:2013-03-26

摘要/Abstract

摘要： 以先前克隆到的黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2 全长的cDNA 为模板，用含有特异性酶切位点
的Yh1、Yh2 为引物，通过PCR 方法将黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2 的ORF 区构建到大肠杆菌表达载体
pGEX-4T-1 上获得原核表达载体p4t-LOX2，将该表达载体p4t-LOX2 转化到大肠杆菌菌株BL21（DE3）
中，获得相应的重组工程菌。在IPTG 诱导下，通过SDS-PAGE 电泳，得到一条约115 kD 的融合蛋白条带，
除去pGEX-4T-1 自身诱导的约26 kD 大小的GST 标签蛋白后，CsLOX2 编码一个约89 kD 的蛋白。经过
融合蛋白表达体系的优化分析，表明该融合蛋白在 37℃，0.80 mmol·L^-1 IPTG 诱导表达 10.5 h，可获得
融合蛋白的最大表达量。

关键词: 黄瓜, 脂氧合酶, 原核表达

Abstract: The ORF of cucumber（Cucumis sativus L.）CsLOX2 gene was inserted into an
expression vector pGEX-4T-1 through PCR method using specific primers Yh1 and Yh2，and the
recombined expression vector p4t-LOX2 was constructed. The expression amount of fusion protein
was detected under different expressive conditions，such as different time，different temperature and
different concentration of IPTG. The 115 kD fusion protein was obtained and induced by IPTG and it
showed that CsLOX2 gene encoded a 89 kD protein after the 26 kD GST protein tag was removed．The
proper induction condition was 37 ℃ temperature，0.80 mmol·L^-1 IPTG concentration and 10.5 h
inducing time.

Key words: Cucumber, Lipoxygenase, Prokaryotic expression

中图分类号:

S642.2

陈巧, 陈书霞, 王聪颖, 郝丽宁, 万旭花, 申晓青, 程智慧. 黄瓜脂氧合酶基因CsLOX2 的原核表达载体
的构建及表达分析[J]. 中国蔬菜, 2013, 1(10): 29-35.

CHEN Qiao, CHEN Shu-Xia, WANG Cong-Ying, HAO Li-Ning, WAN Xu-Hua, SHEN Xiao-Qing, CHENG Zhi-Hui. Construction and Expression of a Cucumber Lipoxygenase Gene CsLOX2 in
Prokaryotic Cells[J]. , 2013, 1(10): 29-35.

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