中国蔬菜 ›› 2023, Vol. 1 ›› Issue (1): 60-67.
朱广雪1,2☆,阎昱韬2☆,孙炳学2,周荣佳2,岳圆圆2,谢学文2,柴阿丽2,李磊2,李宝聚2*,石延霞2*
ZHU Guangxue1,2☆,YAN Yutao2☆,SUN Bingxue2,ZHOU Rongjia2,YUE Yuanyuan2,XIE Xuewen2,CHAI Ali2,LI Lei2,LI Baoju2*,SHI Yanxia2*
摘要: 根据GenBank已登录序列中黄瓜多主棒孢琥珀酸脱氢酶B 亚基(SdhB)基因序列差异,针对SdhB-H278Y 突变设计特异性引物,建立SdhB-H278Y突变实时荧光定量PCR(real-time PCR)检测体系。结果表明:供试多主棒孢携带SdhBH278Y、SdhB-I280V突变;SdhB-H278Y突变株对啶酰菌胺抗性较强,EC50值为21.47 μg·mL-1 或> 30 μg·mL-1;建立的real-time PCR检测体系具有良好的线性关系,相关系数R2 = 0.992 9,可特异性检测SdhB-H278Y突变,灵敏度为3.6 × 10-4 ng·μL-1,为AS-PCR的10倍。利用携带SdhB-H278Y突变不同比例的基因组DNA 对检测体系进行验证,预期值与检测值具有很高的相关性,R2 = 0.999 7;利用该检测体系对山东地区黄瓜棒孢叶斑病病斑中多主棒孢SdhB-H278Y突变株所占比例进行检测,检测结果为0.12%~2.69%。综上,本试验建立的real-time PCR检测体系高效、灵敏、定量,可用于多主棒孢SdhB-H278Y突变的检测,为黄瓜棒孢叶斑病抗性治理提供技术支持。