结球甘蓝SSR检测体系的建立及优化
司军,李成琼* ,宋洪元,任雪松,宋明,王小佳
西南大学园艺园林学院,重庆市蔬菜学重点实验室,重庆 400715
Establishment and Optimization of SSR Detection System in Cabbage(Brassica oleracea
var.capitata L.)
SI Jun,LI Cheng-qiong* ,SONG Hong-yuan,REN Xue-song,SONG Ming,WANG Xiao-jia
Chongqing Municipal Key Laboratory of Olericulture,College of Horticulture and Landscape
Architecture,Southwest University,Chongqing 400715,China
摘要
摘,要:以结球甘蓝自交系15R(南宝)和14S(北黑大平头)为试材,建立了甘蓝SSR-PCR反应体系,并从
PCR反应组成、扩增程序等环节对SSR-PCR反应体系进行了优化。即10.00 μL反应体系组成为:1×
Buffer(含20.00 mmol·L-1 MgCl2 )、50.00 μmol·L-1 dNTPs、0.40 U Taq DNA聚合酶、0.40 μmol·L-1
SSR引物、1.00 μL DNA(60.00 ng·μL-1 ),加ddH2O至终体积10.00 μL;对基本扩增程序作了改进,适
宜的扩增程序为:94 ℃预变性5 min后进行20个迫降循环,94 ℃变性45 s,60 ℃退火45 s,72 ℃延伸
1 min,每个循环降低0.5 ℃;再进行15个循环,94 ℃变性45 s,55 ℃退火45 s,72 ℃延伸1 min;72
℃延伸10 min,16 ℃保存。对PCR产物的电泳检测采用聚丙烯酰胺凝胶电泳(银染法)。
关键词 :
甘蓝 ,
SSR ,
检测体系 ,
建立 ,
优化
Abstract :In this study,it established and optimized SSR detection system including
reaction components,amplified program,by using cabbage inbred lines 15R(‘Nanbao’)and
14S(‘Beiheidapingtou’).A stable SSR-PCR system was followed:10.00 μL reaction solution
contained 1×Buffer,50.00 μmol·L-1 dNTPs,0.40 U Taq enzymes,0.40 μmol·L-1 SSR primers
pairs,1.00 μL DNA(60.00 ng·μL-1 ).PCR amplifying program was divided into two steps,after
one denaturing step of 5 min at 94 ℃,DNA was denatured for 45 s at 94 ℃,the annealing
temperature was 60 ℃ and dropped 0.5 ℃ for each cycle,until a final annealing temperature
of 50 ℃ was reached.For the last 15 cycles of the amplification,an annealing temperature
of 55 ℃ was employed.When all cycles were finished,amplification ended for 10 min at 72 ℃
.The polyacrylamide gel electrophoresis was used in the detection of PCR amplification.
收稿日期: 2008-12-12
引用本文:
司军;李成琼*;宋洪元;任雪松;宋明;王小佳. 结球甘蓝SSR检测体系的建立及优化[J]. 中国蔬菜, 2009, 1(12): 19-23.
SI Jun;LI Cheng-qiong*;SONG Hong-yuan;REN Xue-song;SONG Ming;WANG Xiao-jia. Establishment and Optimization of SSR Detection System in Cabbage(Brassica oleracea
var.capitata L.). , 2009, 1(12): 19-23.
链接本文:
http://www.cnveg.org/CN/ 或 http://www.cnveg.org/CN/Y2009/V1/I12/19
[1]
于海龙, 方智远, 杨丽梅, 刘玉梅, 庄木, 李占省, 吕红豪, 张扬勇. SSR 标记辅助芥蓝× 甘蓝型油菜种间杂交后代的遗传背景筛选 [J]. 中国蔬菜, 2015, 1(8): 14-21.
[2]
赵海艳, 吴明生, 宋歌, 牛茜, 田慧芳. 番茄品种SSR 标记鉴定技术研究 [J]. 中国蔬菜, 2015, 1(8): 22-27.
[3]
胡丽萍, 刘光敏, 康俊根, 赵学志, 马越, 何洪巨. 不同结球甘蓝品种硫代葡萄糖苷组分及含量分析 [J]. 中国蔬菜, 2015, 1(6): 42-.
[4]
朱慧芹, 付秋实, 伊鸿平, 王怀松. 甜瓜酸性性状相关QTL 定位分析 [J]. 中国蔬菜, 2015, 1(5): 18-.
[5]
周亚婷, 张国斌, 刘 华, 王福国, 贠小林, 郁继华. 不同水肥供应对结球甘蓝产量、品质及水肥利用效率的影响 [J]. 中国蔬菜, 2015, 1(4): 54-59.
[6]
孙朝辉,孙令强,孙旭亮,陈丽萍,程斐. 耐裂球早熟甘蓝新品种青农55 的选育 [J]. 中国蔬菜, 2015, 1(11): 66-68.
[7]
马振国,欧承刚,刘莉洁,赵志伟,庄飞云. 胡萝卜品种资源遗传多样性及亲缘关系研究 [J]. 中国蔬菜, 2015, 1(11): 28-34.
[8]
蒲全明,高启国,张林成,施松梅,刘晓欢,张莹,毕云龙,任雪松,刘豫东,朱利泉. 结球甘蓝叶片卷曲过程中6 个生长素相关基因的克隆与表达分析 [J]. 中国蔬菜, 2015, 1(11): 19-27.
[9]
李瑞峰, 高 鹏, 朱子成, 栾非时. 基于形态学标记及SSR 标记的甜瓜主栽品种分类鉴定研究 [J]. 中国蔬菜, 2014, 1(6): 20-.
[10]
崔路路, 于海霞, 李景富, 姜景彬, 许向阳. 磁场对结球甘蓝种子萌发的影响及机理研究 [J]. 中国蔬菜, 2014, 1(6): 34-.
[11]
张保才,化娟莉, 张延安. 早熟秋甘蓝新品种达光的选育 [J]. 中国蔬菜, 2014, 1(2): 45-.
[12]
刘东明, 杨丽梅, 唐俊, 刘泽洲, 方智远, 刘玉梅, 庄木, 张扬勇 . 甘蓝无蜡粉亮绿突变体材料LD10遗传规律及分子标记研究 [J]. 中国蔬菜, 2014, 1(12): 21-.
[13]
马慧, 李丽丽, 祝红艳, 陈丽静, 钟鸣, 郭志富. 羽衣甘蓝甘油-3-磷酸酰基转移酶基因的克隆及序列分析 [J]. 中国蔬菜, 2013, 1(8): 32-38.
[14]
牟香丽, 王超, 王帅. 甘蓝无蜡粉突变体叶表皮蜡质超微结构观察 [J]. 中国蔬菜, 2013, 1(4): 32-37.
[15]
杨朴丽, 许俊强, 刘智宇, 王志敏, 张丹华, 汤青林, 宋 明. 结球甘蓝雌蕊调控转录因子SPT 基因的克隆
与序列分析 [J]. 中国蔬菜, 2013, 1(20): 24-31.